临床医学检验职称

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厌氧菌的分离培养

厌氧菌的分离培养主要分初代培养和次代培养两个阶段，其中初代培养相对比较困难，关键的问题就是厌氧环境和培养基的选择。

初代培养的一般原则是：

(1)先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择。

(2)尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基。

(3)最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基。

(4)尽量保证培养基新鲜。

(5)要考虑到微需氧菌存在的可能。

1.选用适当的培养基接种：应接种固体和液体两种培养基;

(1)培养基的使用，应注意下列各点：

1)尽量使用新鲜培养基，2～4h内用完;

2)应使用预还原培养基，预还原24～48h更好;

3)可采用预还原灭菌法制作的培养基(用前于培养基中加入还原剂，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸钠、维生素C及葡萄糖等，尽可能使预还原剂处于还原状态);

4)液体培养基应煮沸10min，以驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种;

5)培养厌氧菌的培养基均应营养丰富，并加有还原剂与生长刺激因子(血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等)。

(2)培养基的选择：初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。

1)非选择培养基：本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂(BHI)、布氏琼脂(BR)、胰豆胨肝粉琼脂(GAM)、胰胨酵母琼脂(EG)、CDC厌氧血琼脂等。

2)选择培养基：为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。

2.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10à2环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。

3.厌氧培养法

(1)厌氧罐培养法。

(2)气袋法。

(3)气体喷射法：又称转管法。

(4)厌氧手套箱培养法：是迄今厌氧菌培养的最佳仪器之一。

(5)其他培养法：平板焦性没食子酸法;生物耗氧法;高层琼脂培养法。

4.厌氧状态的指示：美蓝和刃天青。无氧时均呈白色，有氧时美蓝呈蓝色，刃天青呈粉红色。

5.分离培养厌氧菌失败的原因：①培养前未直接涂片和染色镜检;②标本在空气中放置太久或接种的操作时间过长;③未用新鲜配制的培养基;④未用选择培养基;⑤培养基未加必要的补充物质;⑥初代培养应用了硫乙醇酸钠作为唯一厌氧菌培养基;⑦无合适的厌氧罐或厌氧装置漏气;⑧催化剂失活;⑨培养时间不足;⑩厌氧菌的鉴定材料有问题。

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（责任编辑：hhy）

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