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临床执业医师考试生物化学知识点精讲

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3.膜受体激素信号传导机制

3.1.蛋白激酶a通路

蛋白激酶a(pka)是依赖camp的蛋白激酶的简称。以改变靶细胞内camp浓度和蛋白激酶a活性为主要特征，是激素调节物质代谢的主要通路之一。

例题

在膜受体激素信号传导机制中依赖于camp的蛋白激酶为：

a 酪氨酸蛋白激酶 b 蛋白激酶c

c 蛋白激酶a d 蛋白激酶b

答案：c

3.2.蛋白激酶c通路

肌醇三磷酸(ip3)和甘油二酯(dag)是细胞内的第二信使。dag为脂溶性分子，生成后仍留在质膜上。dag和ca2+在细胞内的靶分子之一是蛋白激酶c(pkc)。pkc作用的底物蛋白质包括质膜受体、膜蛋白、多种酶和转录因子等。因此，通过pkc对下游靶蛋白的磷酸化修饰，参与多种生理功能的调节。

例题

依赖ca2+的蛋白激酶是：

a.pka b.pkc

c.pkg d.rtk

e.g蛋白

答案：b

3.3.酪氨酸蛋白激酶通路

酪氨酸蛋白质激酶(tpk)催化蛋白质分子中的酪氨酸残基磷酸化，部分位于细胞膜的生长因子类受体属于tpk。这些受体被称为受体型tpk。受体型tpk与配体结合后，将形成二聚体，同时酶活性增高，使受体胞内部分的酪氨酸磷酸化增强，磷酸化的受体酶活性又进一步增强。更重要的是，磷酸化的受体募集含有sh2结构域的信号分子，从而将信号传递至下游分子，发挥重要的生理作用。

4.胞内受体介导的信号转导机制

已知通过胞内受体调节的激素有糖皮质激素、盐皮质激素、雄激素、孕激素、雌激素、甲状腺素、维a酸、1，25-(oh)2维生素d3。位于细胞内的受体多为转录因子，当与相应配体结合后进入细胞核内，与dna的顺式作用元件结合，在转录水平调节基因表达。胞内受体通常有四个结构区域。

知识点三：重组dna技术

1.重组dna技术的概述(重要考点)

1.1.概念

①自然界基因转移和重组：重组dna技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。自然界基因转移伴发重组有几种形式：位点特异的重组、同源重组及转座重组。依赖整合酶、在两个dna序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重组。发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组。

②重组dna技术：细菌的基因转移包括接合作用、转化作用和转导作用等(各概念详见课本)。在接合、转化、转导或转座过程中，不同dna分子间发生的共价连接即为重组。

克隆就是来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化，也就是无性繁殖。为研究基因的结构与功能，从构建的基因组dna文库或cdna文库分离、增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组dna技术。

1.2.基因工程基本原理

一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，克隆基因载体的选择与改造，目的基因与载体的连接，重组dna分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组dna转化细胞。实现上述过程需要一些重要的工具酶，如限制性内切核酸酶连接酶等。限制性内切核酸酶是一类识别dna特意序列的内切核酸酶，它的作用特异切开双链dna。

例题

限制性内切酶的作用是：

a.特异切开单链dna

b.特异切开双链dna

c.连接断开的单链dna

d.切开变性的dna

e.切开错配的dna

答案：b

①目的基因的获取：外源基因又称目的基因，来源于几种途径：化学合成、酶促合成cdna，制备的基因组dna及pcr技术。

②基因载体的选择与构建：可作为基因载体的dna分子有质粒dna、噬菌体dna和病毒dna，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。

③外源基因与载体连接：连接方式有：黏性末端连接、平端连接和人工接头连接等。

④重组dna导入宿主细胞：外源dna与载体在体外连接成重组dna分子，需将其导入宿主细胞。随受体细胞生长、增殖，重组dna分子得以复制、扩增。

⑤重组体的筛选：鉴定哪一菌落或嗜菌斑所含重组dna分子确实带有目的基因，即可得到目的基因的克隆，这一过程即为筛选或选择。

⑥克隆基因的表达：在原核或真核表达体系中进行表达，获得所需要的蛋白质。

例题

1.在分子生物学领域中，分子克隆主要是指：

a.dna的大量复制

b.dna的大量剪切

c.rna的大量复制

d.rna的大量剪切

e.反转录酶

答案：a

2.与重组体的筛选无关的是

a.抗药性标志选择

b.分子杂交法

c.酶免检测分析

d.免疫化学法

e.克隆载体的改建

答案:e

2.基因工程与医学

(1)疾病基因的发现：不仅可以发现新的遗传疾病，而且对遗传病的诊断和治疗有着极其重要的意义。

(2)发展新药物：利用基因工程技术生产了许多有药用价值的蛋白质和多肽。

(3)dna诊断：又称基因诊断，是利用分子生物学及分子遗传学的技术和原理，在dna水平上分析、鉴定遗传性疾病所涉及的基因的置换、缺失或插入等突变。

(4)基因治疗：是向功能缺陷的细胞补充相应功能的基因，以纠正或补偿其基因缺陷，达到治疗目的。包括体细胞基因治疗和性细胞基因治疗。

(5)遗传病的防治：①产前诊断;②携带者测试基因;③症候前诊断;④遗传病易感性。

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