第二节 体内样品处理
体内样品处理的常用方法
(1)去除蛋白质法
释放与蛋白结合的药物,测定总浓度,还可保护仪器不被蛋白污染。
①蛋白沉淀法
有机溶剂(按照1:(1~3)比例加入:乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃
强酸(按照1:0.4)比例加入:10%三氯醋酸、7%高氯酸、5%偏磷酸
无机盐(血样和无机盐以1:2混合):饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐
②蛋白分解法 测定某些与蛋白结合牢固、且对酸不稳定的药物时,需用酶解法使蛋白分而释放出药物。
(2)缀合物水解法
常用的缀合物水解法包括酸水解和酶水解。
酸水解:简便、快速、但是专属性差,并需避免药物的进一步降解。
酶水解:时间长,酶试剂带入的粘液蛋白可能污染色谱柱,但是具有选择性较高的特点,常被优先选用。
(3)萃取分离法
1. 液—液萃取法
大部分药物有亲脂性,在弱极性的有机溶剂中的溶解度大于在水中的溶解度。常用有机溶剂
除去大部分的内源性干扰。所选有机溶剂与水不相容、低毒性、对被测组分有较大溶解度。
常用的有乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷、甲基叔丁基醚等。
优点:操作简便、选择性好、去除内源性物质干扰能力强,因为被广泛使用。
2. 固相萃取法
与高效液相色谱柱类似,利用柱色谱的分离方法,将具有吸附、分配或离子交换性质的的大
比表面积吸附填料作为萃取剂填成小柱,将体内样品通过小柱,微量待测组分被保留,而内
源性干扰物质大多不被保留而通过,用淋洗溶剂进一步洗去干扰物后,在用洗脱溶剂将药物
洗脱收集。适用于基质中的酸性、碱性和中性样品的净化与分离。
(4)化学衍生化法
根据待测物的化学结构和检测方法的要求,通过化学衍生物法,特异性的引入功能基团后再
进行分析。通常对药物分子中含有活泼H的极性基团,如含COOH--、--OH、--NH2、--NH—
和—SH,进行化学衍生化。目的是:改变待测药物的色谱行为,增强药物的稳定性,改善
分离能力(手性拆分),提高检测灵敏度
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